從裂解物來源看，無細(xì)胞蛋白表達(dá)技術(shù)主要分為原核系統(tǒng)和真核系統(tǒng)。原核系統(tǒng)以大腸桿菌S30提取物為主，成本低、耐受性強(qiáng)，適合表達(dá)簡(jiǎn)單蛋白或引入非天然氨基酸，但缺乏復(fù)雜翻譯后修飾能力。真核系統(tǒng)包括兔網(wǎng)織紅細(xì)胞裂解物（RRL）和麥胚提取物（WGE），前者適合哺乳動(dòng)物蛋白的高效表達(dá)，后者對(duì)植物和病毒蛋白更優(yōu)，且能處理長(zhǎng)鏈RNA，但成本較高。此外，昆蟲細(xì)胞提取物系統(tǒng)近年也用于復(fù)雜蛋白的修飾研究。英國nuclera 高通量微流控蛋白表達(dá)篩選系統(tǒng)可助力支持無細(xì)胞蛋白表達(dá)技術(shù)，如想了解更多信息，歡迎咨詢官方代理商上海曼博生物！把細(xì)胞的“蛋白生產(chǎn)工具”倒進(jìn)試管，加點(diǎn)基因“設(shè)計(jì)圖”和原料，幾小時(shí)就能??進(jìn)行蛋白表達(dá)。植物蛋白表達(dá)條件篩選

將體外蛋白表達(dá)推向規(guī)模化生產(chǎn)需解決三大he xin瓶頸：裂解物制備標(biāo)準(zhǔn)化問題：不同批次細(xì)胞破碎效率差異導(dǎo)致核酸酶/蛋白酶殘留量波動(dòng)（CV>15%），造成翻譯活性離散度超20%。能量再生持續(xù)性不足：即使采用多酶耦聯(lián)再生系統(tǒng)（如pyruvate kinase,PK-肌激酶級(jí)聯(lián)），ATP濃度常在反應(yīng)啟動(dòng)6小時(shí)后衰減至閾值（<1 mM）以下，大幅限制長(zhǎng)時(shí)程蛋白表達(dá)效率。產(chǎn)物濃度天花板效應(yīng)：受限于核糖體組裝速率（約10個(gè)核糖體/分鐘/條mRNA），當(dāng)前比較高產(chǎn)量只達(dá)5-8 g/L，較CHO細(xì)胞灌注培養(yǎng)系統(tǒng)（>10 g/L）仍有明顯差距。為突破這些限制，前沿策略聚焦于 工程化裂解物開發(fā)—通過CRISPR敲除宿主核酸酶基因（如RNase E）并將關(guān)鍵翻譯因子過表達(dá)100倍以上，使體外蛋白表達(dá)系統(tǒng)的批間穩(wěn)定性提升至CV<5%，ATP維持時(shí)間延長(zhǎng)至24小時(shí)以上，明顯提升了工業(yè)轉(zhuǎn)化潛力。植物蛋白表達(dá)條件篩選隨著工程化裂解物與自動(dòng)化設(shè)備的進(jìn)步，體外蛋白表達(dá)技術(shù)將繼續(xù)向??更低成本、更高精度??進(jìn)化。

無細(xì)胞蛋白表達(dá)技術(shù)（CFPS）根據(jù)反應(yīng)體系的設(shè)計(jì)可分為分批式（Batch）、雙層式（Bilayer）和連續(xù)交換式（CECF）三種主要形式。分批式是Zui基礎(chǔ)的形式，反應(yīng)在單一試管中進(jìn)行，操作簡(jiǎn)單但受限于底物耗盡和副產(chǎn)物積累，表達(dá)時(shí)間通常只4小時(shí)，適合小規(guī)模篩選（如Promega的試劑盒）。雙層式通過密度差異將反應(yīng)液與緩沖液分層，延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間至8-20小時(shí)，日本CFS公司的產(chǎn)品采用此設(shè)計(jì)。連續(xù)交換式（CECF）通過半透膜連接反應(yīng)室與供應(yīng)室，持續(xù)補(bǔ)充底物并移除副產(chǎn)物，可將反應(yīng)延長(zhǎng)至24小時(shí)，產(chǎn)量明顯提高（如德國RTS系統(tǒng)的1mL及以上規(guī)模產(chǎn)品）

無細(xì)胞蛋白表達(dá)技術(shù)（CFPS）的he xin組分包括細(xì)胞裂解物（如大腸桿菌、兔網(wǎng)織紅細(xì)胞或小麥胚芽提取物），其中含有核糖體、tRNA、氨酰-tRNA合成酶及轉(zhuǎn)錄/翻譯因子（如啟動(dòng)/延伸/終止因子）。此外，系統(tǒng)需補(bǔ)充能量再生系統(tǒng)（如ATP、磷酸肌酸與肌酸激酶）以維持反應(yīng)持續(xù)進(jìn)行，以及底物（氨基酸、核苷酸）和輔因子（Mg??、K?等）以支持蛋白質(zhì)合成。例如，大腸桿菌S30提取物常通過敲除核酸酶和蛋白酶來提升蛋白穩(wěn)定性。英國nuclera高通量微流控蛋白表達(dá)篩選系統(tǒng)可支持助力無細(xì)胞蛋白表達(dá)技術(shù)，如想更多關(guān)于該產(chǎn)品的信息，歡迎咨詢官方代理商上海曼博生物！大腸桿菌裂解物??是經(jīng)濟(jì)的體外蛋白表達(dá)平臺(tái)。

無細(xì)胞蛋白表達(dá)技術(shù)（CFPS）是一種在體外（試管中）直接合成蛋白質(zhì)的技術(shù)，利用細(xì)胞裂解物（如大腸桿菌、酵母或哺乳動(dòng)物細(xì)胞提取物）中的核糖體、酶、tRNA等翻譯元件，無需活細(xì)胞即可快速生產(chǎn)目標(biāo)蛋白。he xin特點(diǎn)：高效快速：省去細(xì)胞培養(yǎng)步驟，幾小時(shí)內(nèi)完成表達(dá)（傳統(tǒng)方法需數(shù)天）。靈活可控：可自由添加非天然氨基酸、同位素標(biāo)記物或翻譯調(diào)控因子，定制特殊蛋白。兼容復(fù)雜蛋白：適合表達(dá)毒性蛋白、膜蛋白等傳統(tǒng)細(xì)胞系統(tǒng)難以生產(chǎn)的類型。添加0.5mM PMSF將 ??體外表達(dá)蛋白的降解率??從45%壓制至